規(guī)格：96T/48T

產(chǎn)品用途：科研 實(shí)驗(yàn)

公司服務(wù)：ELISA試劑盒 免費(fèi)代測

雞核因子κB（NF-κB）試驗(yàn)原理：

雞核因子κB（NF-κB）試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知待測物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將待測物質(zhì)和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。

雞核因子κB（NF-κB）試劑盒試劑盒內(nèi)容及其配制

血清：使用血清分離管（SST）和全血標(biāo)本在室溫下兩小時(shí)或4℃過夜℃，然后離心15分鐘，在1000×g下。刪除上清即可檢測，或分裝和店內(nèi)樣品在-20°C或-80°C。但應(yīng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。

等離子：采集血漿中EDTA或肝素作為抗凝血?jiǎng)Ｔ?-8°C在30分鐘內(nèi)收集離心15分鐘，1000×G。即可檢測，或分裝保存樣本在-20°C或-80°C。但應(yīng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。

檢測程序：

在使用前，將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測定前。據(jù)建議，所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)來測定一式兩份。

1。準(zhǔn)備好所有試劑，工作標(biāo)準(zhǔn)和樣品在前面的章節(jié)中。

2。請確定井?dāng)?shù)的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥劑，密封保鮮袋，將未使用的井在4°C的含量布局表

。每孔加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時(shí)，在37℃下一盤布局記錄標(biāo)準(zhǔn)和樣品檢測。

4。每孔中取出的液體，不洗。

5。向每孔中加入100μl生物素抗體（1倍）。蓋上一個(gè)新的膠粘帶。孵育1小時(shí)，在37℃下（生物素抗體（1X）可能會(huì)出現(xiàn)混濁。預(yù)熱至室溫，輕輕混勻，直到出現(xiàn)均勻解決方案。）

6。吸液的各孔和洗滌，共洗滌三次重復(fù)該過程兩次。洗凈，每孔填充洗滌緩沖液（200μL）使用噴瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，靜置2分鐘，*清除液體的每一步是良好的性能。最后一次洗滌后，清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對干凈的紙巾。

7。向每孔中加入100μl的HRP-抗生物素蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一個(gè)新的粘接劑條。溫育1小時(shí)，在37℃下

8。重復(fù)的愿望/洗滌過程中，在步驟6的5倍。

9。將90μlTMB底物添加到每個(gè)孔中。孵育15-30分鐘，在37℃下避光

10。一站式解決方案，每孔加入底物，輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板，以確保充分混合。

11。在5分鐘內(nèi)，設(shè)置至450nm，使用酶標(biāo)儀測定各孔的光密度。如果波長校正，設(shè)置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長在450nm處的讀數(shù)減去讀數(shù)。該減法校正板的光學(xué)缺陷。在450nm處未經(jīng)修正讀數(shù)直接，可能會(huì)比較高，不太準(zhǔn)確.

雞核因子κB（NF-κB）試劑盒局限

6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。

雞核因子κB（NF-κB）試劑盒試劑盒性能

1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。